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Citometría de flujo con fluorescencia

La citometría de flujo con fluorescencia se utiliza para analizar las propiedades fisiológicas y químicas de las células. También se puede utilizar para analizar otras partículas biológicas en analizadores de orina. Básicamente proporciona información sobre:

  • Tamaño y la estructura de las células
  • Interior de las células

La citometría de flujo permite examinar células y partículas que fluyen a través de un flujo laminar.

En primer lugar, se aspira una muestra de sangre y se divide en distintos canales; a continuación, se diluye a un factor preestablecido y se tiñe con un marcador fluorescente patentado que se fija de manera específica sobre los ácidos nucleicos.

La muestra se introduce a continuación en la cámara de flujo y se excita mediante un láser semiconductor, que puede clasificar las células mediante tres señales diferentes:

  • Forward scatter (FSC)
  • Side scatter (SSC)
  • Side fluorescence (SFL)

 

El Forward Scatter nos indica el volumen de la célula, mientras que  el Side Scatter nos ofrece información sobre la complejidad celular como, por ejemplo, sobre el núcleo y los orgánulos. La fluorescencia nos indica la cantidad de ADN y ARN presente en la célula.

Las células con características similares forman un grupo en un gráfico que se denomina diagrama de dispersión.

El principio de la citometría de flujo con fluorescencia se utiliza en diferentes analizadores hematológicos y de orina. Concretamente, en el recuento de células sanguíneas utilizamos la citometría de flujo con fluorescencia, p. ej., para el contaje de leucocitos y eritrocitos nucleados, para la medida de reticulocitos y el recuento diferencial leucocitario (ver todos los valores clínicos) .

En los analizadores de orina, la tecnología de fluorescencia se utiliza para contar bacterias, hematíes, leucocitos y otros elementos.

  • forward-scattered light (forward scatter or FSC)
  • side-scattered light (side scatter or SSC)
  • side-fluorescence light (side fluorescence or SFL).

The intensity of the forward scatter indicates the cell volume. The side scatter provides information about the internal cell structure and its content, such as nucleus and granules. The side fluorescence indicates the amount of nucleic acids present in the cell.

Cells with similar physical and chemical properties form a cluster in a graph known as a scattergram.

The principle of fluorescence flow cytometry is used in different analysers for haematology and urinalysis. For blood cell counts we use fluorescence flow cytometry, e.g. for the WBC and differential, for NRBC counting and reticulocyte measurement.

In urinalysis analysers, fluorescence technology is also used for counting bacteria, red blood cells, white blood cells and other elements.

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