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Calendario científico noviembre de 2020

¿Cómo se detectan los linfocitos neoplásicos en el canal de medición WPC? 

Las membranas celulares de los linfocitos neoplásicos son más maduras y se impregnan más fácilmente, lo que provoca señales de fluorescencia más elevadas.

Las membranas celulares están ligeramente perforadas, mientras que las células permanecen mayormente intactas. El marcador de fluorescencia etiqueta los ácidos nucleicos intracelulares (principalmente ARN).

Las señales de la luz con dispersión lateral de los linfocitos neoplásicos son menores que las de otros leucocitos.

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Fundamentación científica

El linfoma de células del manto (LCM) es un tipo de linfoma específico y la causa más común de cáncer hematológico [1]. Los linfomas se caracterizan por la proliferación descontrolada de linfocitos, un subgrupo de leucocitos, y forman un grupo heterogéneo de enfermedades.

En el cuerpo humano existen diferentes subgrupos de linfocitos, como las células T y las B. Los linfomas, causados por células B y T malignas, se dividen en linfoma de Hodgkin (LH) y linfoma no Hodgkin (LNH). El linfoma de células del manto es un linfoma raro de células B y por lo tanto pertenece al grupo de los LNH [1].

El nombre "linfoma de células del manto" deriva de la etiología de las células malignas, que se originan en la zona del manto del ganglio linfático. Estas células B neoplásicas viajan por el cuerpo y forman masas tumorales periféricas. La enfermedad se considera agresiva y de evolución rápida. Según la clasificación de linfomas de la OMS, existe un segundo tipo de linfoma de células del manto indolente (de progresión más lenta), pero también es incurable y puede progresar hacia la forma agresiva [2].

El aumento del número de linfocitos neoplásicos en la sangre de los pacientes puede observarse en un hemograma completo y, por lo tanto, proporciona un nuevo procedimiento de diagnóstico diferencial hasta obtener el diagnóstico definitivo.  

Uno de los mayores retos de la citología es la diferenciación de los linfocitos en las películas de sangre porque se presentan muchas variedades, y las enfermedades son múltiples. Para obtener resultados de citología sanguínea sólidos, además de un analista experimentado es fundamental disponer de una nomenclatura normalizada, especialmente en los casos en los que hay alteraciones de los linfocitos. Los linfocitos de aspecto inusual pueden ser liberados a la sangre periférica debido a enfermedades reactivas (por ejemplo, infecciones virales) y neoplasias (por ejemplo, linfomas). De acuerdo con la clasificación de linfocitos de 2011, estos linfocitos se describen como "atípicos", independientemente de cuál sea su causa. Aquí, "atípico" significa que, cuando se tiñen según el método de Pappenheim, estos linfocitos tienen un aspecto diferente de los típicos linfocitos o células de linfocitos grandes granulares (LGG) [3].

Examples of typical and atypical lymphocytes

La caracterización del inmunofenotipo, el diagnóstico histológico y los análisis citogenéticos y de genética molecular complementarios son esenciales para la posterior clasificación celular y valoración del pronóstico.

Utilizando un ingenioso sistema de reactivos, los analizadores de la serie XN de Sysmex permiten diferenciar las células por su funcionalidad, superando las limitaciones del examen morfológico y haciendo posible llegar a conclusiones sobre

  • la madurez de una célula,
  • la malignidad de una célula,
  • el estado de activación de una célula [4].

Resultados numéricos

Se investigó en el laboratorio una muestra de sangre periférica de un hombre de 60 años sin antecedentes médicos. El historial familiar del paciente incluye un diagnóstico de linfoma de Hodgkin de la madre. El análisis reveló una marcada leucocitosis junto con anemia (HGB = 73 g/L o 4,5 mmol/L) y trombocitopenia grave (PLT = 13 x109/L). A partir de una nueva muestra de sangre, una segunda medición que incluía el canal PLT-F confirmó la trombocitopenia grave con un resultado de plaquetas PLT-F = 8 x109/L. La cuestión en tales casos es siempre determinar si los linfocitos son de origen reactivo o neoplásico.

Interpretación del diagrama de dispersión

Utilizando el perfil de medición de hemograma completo con recuento diferencial (CBC+DIFF) en un analizador XN, los leucocitos se cuentan en el canal de medición WNR y se diferencian en el canal de medición WDF. En el diagrama de dispersión de este paciente, no fue posible separar claramente las subpoblaciones de leucocitos, lo que llevó al mensaje de aviso "Blasts/Abn Lympho?". Tanto los linfocitos reactivos como las células del linfoma muestran una fluorescencia más elevada (véase el cúmulo gris).

El canal WPC es otro canal de medición para identificar los leucocitos precursores y patológicos que utiliza un conjunto específico de reactivos que influyen en la permeabilización de la membrana celular. Esta avanzada tecnología permite separar las células sospechosas de malignidad de las sanas.

Un alto grado de daño en la membrana causado por el reactivo para la lisis WPC lleva a que los componentes celulares se filtren a través de los poros, lo que tiene como resultado un tamaño celular más reducido. Además, puede penetrar en la célula más marcador fluorescente y así se une incluso al ADN nuclear, lo que a su vez conduce a una mayor intensidad de la señal de fluorescencia. Los linfocitos neoplásicos tienen una estructura de membrana más madura que, por ejemplo, los blastos y, por lo tanto, se permean más fácilmente, y ello provoca señales de fluorescencia más elevadas. En este ejemplo de caso, saltó el mensaje de aviso 'Abn Lympho?', que indica sospecha de linfocitos neoplásicos.

El posterior análisis citométrico de flujo confirmó una gran población de células B monoclonales con fenotipo que correspondía a un linfoma de células del manto (véanse los resultados detallados a continuación).

Resultados del inmunofenotipaje

El número absoluto de células B monoclonales fue de 57,59 x 109/l con un 91 % de linfocitos, un 0,2 % de células T CD3+ y un 0,1 % de células NK. La relación CD4/CD8 fue de 2.
91% de células B CD19+ anómalas con este fenotipo: Kappa++, CD19+, CD20++, CD5+, CD38zw+, FMC7+, CD79b+, CD43-, CD10-, CD200-, cociente K/L monoclonal: >10, CD23 posiblemente débilmente positivo (fondo alto).

Además, la biopsia de médula ósea mostró que en torno al 70 % de la médula ósea estaba ocupada por un linfoma no Hodgkin de células B pequeñas cuya inmunohistoquímica mostraba máxima coherencia con un linfoma de células del manto.

Bibliografía

[1] Fact sheet ‘Mantle Cell Lymphoma’ from lymphoma.org. Access date 03.09.2020.

[2] Swerdlow SH et al. (2016) The 2016 revision of the World Health Organization classification of lymphoid neoplasms. Blood127(20): 2375–2390. https://doi.org/10.1182/blood-2016-01-643569.

[3] SEED ‘Lymphocyte differentiation update – helpful or dispensable?

[4] Sysmex white paper ‘Going beyond the visible: Reliable characterisation of WBC functionality.’

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