A combinação dos canais de análise WDF e WPC através da utilização de citometria de fluxo com fluorescência num único analisador permite-nos detetar de forma sensível e específica células reativas e malignas. Tal é possível tirando partido das diferenças na funcionalidade dos diferentes leucócitos.

No canal diferencial dos leucócitos (WDF, white blood cell differential), a marcação com o fluorocromo depende da composição da membrana e do conteúdo citoplasmático dos leucócitos. A composição da membrana lipídica das células ativadas ou imaturas é diferente da observada em células não reativas e maduras. A combinação única de reagentes (lise e marcação) e do tempo de incubação permite a separação de diferentes populações celulares. Em primeiro lugar, o reagente de lise perfura as membranas celulares, dependendo a extensão dos danos da sua composição lipídica o que, por sua vez, depende do tipo de célula (nível de maturidade) e do estado da célula (estado de ativação). Seguidamente, o marcador fluorocrómico marca principalmente o ARN no citoplasma. A intensidade do sinal fluorescente resultante depende do grau de perfuração da membrana (composição lipídica) e da quantidade total de ARN no citoplasma. A informação sobre a composição da membrana e ARN citoplasmático (fluorescência), volume celular (dispersão frontal) e estrutura intracelular (dispersão lateral) é analisada através de algoritmos patenteados que permitem a deteção sensível de células reativas, imaturas ou patológicas presentes numa amostra de sangue.

O reagente de lise do canal WPC apresenta um efeito superior sobre membrana lipídica devido à presença de um surfactante diferente e a um período de incubação mais longo, em comparação com o canal WDF. Para além disso, o reagente fluorescente apresenta uma concentração de polimetina superior e, como tal, o ADN do núcleo é marcado. A presença das chamadas “jangadas lipídicas” constitui um exemplo de como a composição da membrana lipídica é afetada pela funcionalidade ou estado de ativação da célula. As jangadas lipídicas são microdomínios ricos em colesterol e glicoesfingolípidos presentes nas membranas celulares plasmáticas, que desempenham um papel importante no tráfego proteico e na sinalização celular. As jangadas lipídicas encontram-se mais ordenadas e próximas que a bicamada da membrana circundante, mas circulam de forma livre nesta bicamada. Foram descritos valores elevados destas jangadas lipídicas na membrana celular de células mais ativas em termos de comunicação extracelular (por exemplo, em células malignas e células maduras ativadas), em comparação com células maduras em repouso e células imaturas (2-3).

A maior permeabilização de alguns tipos celulares, tais como linfócitos anormais, conduz à perda citoplasmática e um tamanho celular reduzido (sinal de dispersão frontal). Assim, enquanto o canal WDF sugere principalmente atividade citoplasmática, o canal WPC deteta células anormais através da composição da sua membrana, conduzindo a diferenças no tamanho (encolhimento de alguns tipos celulares) e maior acesso ao conteúdo de ADN, o qual é marcado de forma mais intensa.

Através da combinação de ambos os canais – e do conjunto dos seus reagentes e condições de reação – a sensibilidade e a especificidade para a deteção de células reativas e malignas são otimizadas.