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Calendario Científico 2018 - Julio

¿En qué se diferencian los procedimientos de lisis y de tinción de leucocitos en los canales WDF y WPC? El reactivo para la lisis en el canal WPC tiene un mayor efecto sobre los lípidos de la membrana. El tiempo de incubación del surfactante es más prolongado, el reactivo fluorescente tiene una concentración de polimetina más elevada y el ADN del núcleo se marca en el canal WPC.
El reactivo para la lisis en el canal WDF tiene un mayor efecto sobre los lípidos de la membrana. El tiempo de incubación del surfactante es más prolongado, el reactivo fluorescente tiene una concentración de polimetina más elevada y el ADN del núcleo se marca en el canal WDF.
El reactivo para la lisis en el canal WPC tiene un mayor efecto sobre los lípidos de la membrana. El tiempo de incubación del surfactante es más prolongado, el reactivo fluorescente tiene una concentración de polimetina más baja y el ARN citoplásmico se marca en el canal WPC.
El reactivo para la lisis en el canal WDF tiene un mayor efecto sobre los lípidos de la membrana. El tiempo de incubación del surfactante es más corto, el reactivo fluorescente tiene una concentración de polimetina más elevada y el ADN del núcleo se marca en el canal WDF.

Base científica

Combinar los canales de análisis WDF y WPC mediante citometría de flujo con fluorescencia dentro de un único analizador nos permite detectar células reactivas y malignas de manera específica y con la sensibilidad necesaria. Esto se consigue al aprovechar las diferencias en términos de funcionalidad celular de los distintos tipos de leucocitos.

En el canal de diferenciación leucocitaria (WDF), el marcado fluorocromático depende de la composición de la membrana y del contenido citoplasmático de los leucocitos. La composición de la membrana lipídica de células activadas o inmaduras es distinta a la de células no reactivas y maduras. Una combinación singular de reactivos (lisis y etiquetado) y tiempo de incubación permite la separación de poblaciones celulares distintas. En primer lugar, el reactivo para la lisis perfora las membranas celulares, por lo que la intensidad del daño en la membrana depende de la composición lipídica, la cual depende a su vez del tipo de célula (nivel de madurez) y de su estado (estado de activación). A continuación, el marcador fluorocromático etiqueta principalmente el ARN en el citoplasma. La intensidad de la señal fluorescente obtenida depende del grado de perforación de la membrana (composición lipídica) y de la cantidad total de ARN del citoplasma. La información sobre la composición de la membrana y el ARN citoplásmico (fluorescencia), el volumen celular (dispersión hacia delante) y la estructura intracelular (dispersión lateral) se analiza mediante nuestros algoritmos, que permiten una detección sensible de las células reactivas, inmaduras o patológicas en una muestra de sangre.

El reactivo para la lisis en el canal WPC tiene un mayor efecto sobre los lípidos de la membrana por emplear un surfactante diferente y un tiempo de incubación más prolongado en comparación con el canal WDF. Además, la concentración de polimetina del reactivo fluorescente es más elevada y, por consiguiente, el ADN del núcleo se marca. Un ejemplo de cómo la composición lipídica de la membrana se ve afectada por la funcionalidad celular o el estado de activación es la presencia de las llamadas "balsas lipídicas". Las balsas lipídicas son microdominios ricos en colesterol y glucoesfingolípidos en las membranas de plasma celular que desempeñan papeles importantes en el tráfico de proteínas y la señalización celular. Las balsas lipídicas están más ordenadas y más estrechamente agrupadas que la membrana bicapa que las rodea, pero flotan libremente en esta bicapa. Se ha informado de la presencia de niveles elevados de balsas lipídicas en la membrana celular de células más activas en comunicación extracelular (p. ej. células maduras malignas y activadas) en comparación con las células maduras en reposo y las células inmaduras (2-3).

Algunos tipos de células presentan una mayor permeabilidad, como los linfocitos anómalos, lo que conlleva pérdida citoplásmica y un tamaño celular más reducido (señal de dispersión hacia delante). Por lo tanto, mientras el canal WDF sugiere en la mayoría de casos actividad citoplásmica, el canal WPC detecta células anómalas por la composición de sus membranas, lo que tiene como resultado diferencias en el tamaño (contracción de algunos tipos de células) y mayor acceso al contenido de ADN, que se etiqueta de manera más intensiva.

Mediante la combinación de ambos canales y de sus respectivos conjuntos de reactivos y condiciones de reacción, se optimizan tanto la sensibilidad como la especificidad en la detección de células reactivas y malignas.

Bibliografía

  1. Kawauchi S et al. (2014): Comparison of the Leukocyte Differentiation Scattergrams Between the XN-Series and the XE-Series of Hematology Analyzers. Sysmex Journal International Vol.24 No.1.
  2. Tuosto L et al. (2001): Organization of plasma membrane functional rafts upon T cell activation. Eur J Immunol. 31(2): 345 – 9.
  3. Li YC et al. (2006): Elevated Levels of Cholesterol-Rich Lipid Rafts in Cancer Cells Are Correlated with Apoptosis Sensitivity Induced by Cholesterol-Depleting Agents. Am J Pathol. 168(4): 1107 – 18.
  4. Kawauchi S et al. (2013): The Position of Normal Leukocytes on the Scattergram of the Newly Developed Abnormal Cell-detection Channel of the XN-Series Multi-parameter Automated Hematology Analyzers. Sysmex Journal International Vol.23 No.1.

Calendario científico de 2018

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