En la investigación en oncología traslacional, optimizar el uso de muestras biológicas limitadas es fundamental, especialmente cuando deben evaluarse múltiples dianas genéticas para una caracterización exhaustiva. Las instituciones de investigación están adoptando cada vez más técnicas moleculares avanzadas —como sondas de hibridación fluorescente in situ (FISH) de tres colores— para investigar alteraciones genómicas complejas de forma eficiente y con un consumo mínimo de muestra.

Se evaluó una muestra de investigación obtenida de un donante adulto físicamente activo sin patología ósea previa tras una fractura espontánea. Una prueba de imagen reveló lesiones osteolíticas extensas, lo que llevó a la hipótesis de una neoplasia de células plasmáticas, como el mieloma múltiple (MM). Dada la complejidad del diagnóstico diferencial, se realizó un panel inicial de análisis de FISH, incluyendo:

Deleción de TP53
Amplificación/deleción de CKS1B/CDKN2C
IGH/FGFR3 Breakapart/Dual Fusion
IGH/CCND1/MAF

Tri-Colour CytoCell myProbes^® IGH/FGFR3 Breakapart/Dual Fusion resultó especialmente informativo, al revelar una deleción de un alelo de IGH y un reordenamiento del segundo, hallazgos que probablemente habrían pasado desapercibidos con sondas bicolores convencionales. A partir de este resultado, la investigación se amplió posteriormente para incluir:

IGH/MAFB Dual Fusion
IGH/MYC Dual Fusion

Las pruebas adicionales identificaron una deleción 1p y una translocación t(8;14) IGH::MYC / MYC::IGH. Estas anomalías se excluyen habitualmente de los paneles estándar y habrían quedado sin detectar sin la estrategia de multiplexación más amplia.

Este caso pone de relieve la importancia de la selección estratégica de sondas y de la optimización de los ensayos en los flujos de trabajo de investigación para descubrir eventos genómicos clínicamente relevantes que, de otro modo, podrían pasar desapercibidos.

Ventajas de las sondas FISH de tres colores

CytoCell myProbes^®IGH/FGFR3 Breakapart/Dual Fusion Probe V3 (MPD57050)

Especificaciones de la sonda

IGH, 14q32.33, rojo/verde
FGFR3, 4p16.3, aqua

El uso de sondas tricolores en el diagnóstico del MM reduce el número de portaobjetos necesarios, lo cual es importante cuando hay un número reducido de células CD138+ seleccionadas. También facilita la evaluación de la translocación desequilibrada gracias a la observación de una señal incompleta del gen IGH – que, en un porcentaje bajo de células, podría interpretarse como una superposición aleatoria de señales en la sonda de dos colores.

Fig. 1: Mapa de la sonda CytoCell myProbes® IGH/FGFR3 Breakapart/Dual Fusion Probe V3 (MPD57050).

Fig. 2: CytoCell myProbes® IGH/FGFR3 Breakapart/Dual Fusion Probe V3 (MPD57050). El gen IGH (cromosoma 14) es rojo-verde, y el gen FGFR3 (cromosoma 4) es azul. Esto permite examinar t(4;14) y el estado de reordenamiento del gen IGH con un único portaobjetos. Ambas imágenes muestran un patrón de señales normal, es decir, sin reordenamiento de IGH y sin translocación de (4;14).

CytoCell myProbes^® IGH/CCND1/MAF Dual Fusion Probe V2 (MPD22710)

Especificaciones de la sonda

IGH, 14q32.33, rojo
CCND1, 11q13.3, verde
MAF, 16q23.1-q23.2, aqua

El uso de la sonda tricolor IGH/CCND1/MAF ofrece más ventajas. Al eliminar la discontinuidad en el marcaje del gen MAF y cubrir los genes CCND1 y MYEOV, permite detectar anomalías en un único portaobjetos en lugar de en dos y permite la detección de t(11;14).

Fig. 3: Mapa de la sonda CytoCell myProbes® IGH/CCND1/MAF Dual Fusion Probe V2 (MPD22710).

Agradecimientos

Ariel Najdowski
Especialista sénior en genética molecular
Departamento de Genética Molecular y Celular
Universidad Nicolás Copérnico en Toruń
Bydgoszcz, Polonia

Limitación de responsabilidades

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CytoCell myProbes^®: Solo para uso en investigación; no para uso en procedimientos diagnósticos.